尊龙凯时的类器官原代培养流程的概述

一、准备工作

在进行类器官培养之前，需准备以下仪器设备和试剂耗材：

• 仪器设备：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冷冻离心机、水浴锅、医用冰箱、-80℃冰箱、移液器、眼科剪、眼科镊等。
• 试剂耗材（以肠癌为例）：动物脑类器官培养基、基质胶、细胞培养皿、滤筛、离心管、细胞培养板等。

二、操作流程

1. 样本准备

将组织样本放入4℃的组织保存液中，随即进行消毒与登记，以便后续处理。

2. 清洗与剪碎

使用原代培养缓冲液对组织进行清洗，随后剪成1-3mm³的小块。

3. 消化与过滤

将组织块加入消化液进行消化，并通过显微镜观察细胞团的形成。之后过滤并离心去除上清。

4. 加胶、点板与加液

准备基质胶并在冰上进行混匀，随后将混合好的细胞团与基质胶点入培养孔中，最后添加培养基，放入培养箱中。

三、传代操作

1. 类器官数量较多或体积较大时的传代步骤

在洗涤后轻柔收集并离心分层，保留类器官沉淀，进行细胞消化、加胶和点板的操作。

2. 类器官数量不足或体积较小时的步骤

此时需适当调整室内环境，确保实现良好的吹打与稀释效果，确保基质胶与类器官有效分离。

四、冻存及复苏

1. 冻存要领

类器官在增殖指数期时进行冻存，确保其活性。同时应严格控制冻存的基质胶浓度。

2. 复苏操作

复苏前需预热水浴锅，并在无菌条件下解冻和重悬类器官，控制适当的培养条件。

通过以上步骤，能够高效、稳定地培养类器官，为生物医疗研究提供可靠支持，尊龙凯时愿与您携手并进，共同探索更广阔的生物医疗领域！