单克隆细胞株的开发在生物制药生产中扮演着至关重要的角色，特别是在单克隆抗体的制备方面。为了确保产品的一致性，所使用的细胞株必须来源于单个细胞。常见的克隆工作流程通常包括一至两轮的单细胞克隆，随后通过孔板成像确认单细胞是否成功分配。然而，传统的有限稀释法或流式细胞术等方法并不能有效验证是否仅分配了单个细胞，这使得单克隆性的确认过于依赖于孔板成像的准确性。

孔板成像在细胞检测过程中存在固有误差，并且需要依赖离心操作以确保所有细胞位于成像焦平面内。这些误差的累积降低了在特定工作流程中实现单克隆性的可能性，因此，高精度的成像技术和检测方法显得尤为重要。尊龙凯时的UPSIGHT20影像式单细胞打印与成像系统通过双重验证机制有效解决了细胞分配中的挑战。

该系统的第一次验证是通过一系列喷嘴图像记录单细胞的分离情况，第二次验证则采用3D全孔成像技术直接捕获液体体积的图像。这种3D成像技术能够完整捕捉液体体积，从而避免了克隆后所需的离心操作。此外，UPSIGHT20还支持菌落生长后的实时监测，兼容多种孔板，适用于高通量工作流程，并且单细胞分配效率超过98%。

本研究分析了4000个单细胞和近1000个生长的菌落，结果表明：结合喷嘴图像与3D全孔成像，细胞株的单克隆性概率超过9999%，且无需依赖荧光染色或成像技术。UPSIGHT20在克隆、克隆验证和追踪方面提供了一个完整的工作流程。流程的第一步是将细胞悬液加载到设备中的一次性墨盒中。

在单细胞分配过程中，喷嘴不断生成微型自由飞行液滴，并进行实时成像。图像处理算法实时评估即将到来的液滴，判断其是否包含0、1或多个细胞。如果液滴被判定为包含多个细胞或其特征不符合预设标准，该液滴将被丢弃。相反，若检测到1个单细胞且符合标准，则该细胞将被分配至孔板中。

针对每个成功分配的单细胞，UPSIGHT20系统会生成多张图像，以确认单细胞的分离与排出情况。分配完成后，使用孔板下方的相机进行3D全孔成像，捕获孔中的一系列图像。这种成像方式消除了对孔板进行离心的需求，而细胞通常位于液体体积的上半部分，从而提升了细胞检测的准确性。

在克隆之后，UPSIGHT20能够对具有理想生长曲线的特定克隆进行成像并追踪其群体生长。此外，UPSIGHT20还对每个孔的工作流程进行了优化，通过喷嘴成像验证分配的液滴中仅包含单个细胞，并对分配后的孔进行多次3D全孔成像，确保克隆性的一致性。

喷嘴图像与3D全孔成像的结合进一步验证了细胞在孔板中的分布情况。这一技术的应用显著提升了单细胞分配的验证可靠性，单细胞分配效率超过98%。尽管在某些情况下可能发生误判，但3D全孔成像为单细胞分配的确认提供了额外保障。

为验证UPSIGHT20实现单克隆性的概率，本研究对喷嘴图像和3D全孔成像相关的误差率进行了评估。结果表明，UPSIGHT20为单克隆性提供了超过9999%的概率，同时显著提升了成像速度。由于3D全孔成像流程中，细胞聚焦图像堆叠的一致性，处理时间大幅减少。

尊龙凯时的UPSIGHT20不仅提升了单细胞研究的准确性和效率，还为未来的细胞生物学研究提供了强大的工具支持。这一技术的出现，将推动细胞研究领域的发展，为深入理解细胞行为与特性奠定基础。