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尊龙凯时RNA提取的Trizol法原理与步骤解析

发布时间:2025-02-19   信息来源:尊龙凯时官方编辑

Trizol试剂的主要成分为苯/酚,其核心功能在于有效裂解细胞,使细胞内的蛋白质和核酸得以释放。虽然苯/酚能够有效使蛋白质变性,但其对RNA酶的抑制作用并不完全,因此Trizol中还添加了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍与β-巯基乙醇等成分,以进一步抑制内源和外源RNA酶的活性。这使得Trizol成为一个理想的试剂,用于直接从细胞或组织中提取总RNA。

尊龙凯时RNA提取的Trizol法原理与步骤解析

在样品裂解液或匀浆中,Trizol能够有效保持RNA的完整性。加入氯仿(CHCl3)后进行离心,样品将分为水相层与有机层,其中RNA位于水相层内。将上层水相层收集后,RNA可以通过异丙醇沉淀法进行提取。同时,在去除水相层后,样品中的核酸和蛋白质也能以沉淀形式相继回收。乙醇沉淀可以析出中间层的DNA,而在有机层中加入异丙醇则可析出有机层的蛋白质。

Trizol试剂适用于多种样品,从小量(组织:50-100mg;细胞:5×106)到大量(组织≥1g或细胞≥107),广泛应用于动物、植物、细菌及血液样品的 RNA 提取,并能够同时处理不同类型的样品。其反应速度快,提取的总RNA可避免DNA和蛋白质污染,非常适合用于Northern blot、RT-PCR、RNase保护分析等多种生物医学实验。

TRIZOL提取RNA步骤

1. 在提取组织RNA时,使用1ml Trizol试剂对每50-100mg组织进行裂解;提取细胞RNA时,首先离心沉淀细胞,每5-10×106个细胞加1ml Trizol,随后用枪吹打或剧烈振荡以确保细胞完全裂解。

2. 将裂解后的Trizol液转移至EP管,在室温(15~30℃)下静置5分钟。然后,按照每1ml Trizol添加0.2ml氯仿,盖紧管盖以手动震荡15秒。室温下放置2~3分钟后,以12000g(2℃~8℃)离心15分钟。

3. 将上层水相转移至新EP管中,按照每1ml Trizol加入0.5ml异丙醇,室温下静置10分钟后,以12000g(2℃~8℃)离心10分钟。

4. 用75%乙醇洗涤RNA沉淀,按照每1ml Trizol添加1ml 75%乙醇,涡旋混合并在7500g(2℃~8℃)下离心5分钟,弃去上清液,随后让RNA沉淀在室温下自然干燥,最后用无RNA酶水溶解RNA沉淀。

须知:收集生物材料后应立即进行RNA制备。如需暂时储存,应迅速使用液氮将生物材料冷冻,并储存在-80℃冰箱中。在制备RNA时,切勿直接解冻存储在冷冻柜的材料,应立即在液氮中研磨打破细胞,以防止RNase的活性。

在生物医疗研究中,利用尊龙凯时的Trizol试剂进行RNA提取,可确保结果的可靠性与准确性,是科研人员的最佳选择。