尊龙凯时在生物医疗领域的细胞培养技术逐渐受到关注。我们将探讨细胞系与细胞株的概念及其建立要求，并介绍肿瘤细胞的培养要点以及人类淋巴母细胞的建株方法。

一、细胞系与细胞株的定义

1. 细胞系（Cell Line）：指在原代培养后成功进行首次传代而形成的细胞群，源自原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）。

2. 细胞株（Cell Strain）：通过特定的选择或克隆形成法，从原代培养物或细胞系中获取具有特定性质或标志物的细胞称为细胞株。这些特殊性质或标志必须在整个培养期间持续存在。若不能无限传代或传代次数有限，则称为有限细胞株（finite cell strain）；若可以进行连续传代，则称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞来说，在体外培养超过六个月且能稳定生长并持续传代的细胞可以称为连续性株或系。

二、细胞系（或株）建立的要求

细胞培养群的识别标准因具体情况而异，暂无统一规定。对原代培养细胞，需确保供体均一，取材部位及组织种类等条件的稳定，例如，进行长期或反复传代时，应详细说明：

1. 组织来源：需列出细胞供体物种（人类或动物）、个体性别与年龄、取材器官或组织。如为肿瘤组织，必须提供临床与病理诊断信息，以及病历号等。

2. 细胞生物学检测：了解细胞的基本与特殊生物学性状，如细胞形态、特异结构、生长曲线、分裂指数与倍增时间等。针对肿瘤细胞，应进行软琼脂培养、异体接种致瘤性以及对正常组织的侵润力实验，以证明其恶性特征。

3. 培养条件与方法：进一步说明细胞系（或株）的生存环境，包括使用的培养基、血清种类、用量及适宜的pH值。

三、细胞株建立的关键要点与基本过程

（一）肿瘤细胞培养技术要点

1. 取材：肿瘤细胞的取材主要来源于外科手术或活检，需避免使用坏死组织，尽量选择瘤细胞集中、活力良好的部位，如瘤性转移淋巴结或胸腹水。取材后应尽快进行培养，若不能立即处理，则需冻存，培养与冻存方法同前述正常组织。

2. 成纤维细胞的排除：肿瘤组织中常杂有成纤维细胞，这些细胞会与癌细胞共同生长并抑制其生长，因此需仔细排除。排除方法包括机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法及胶原酶消化法等。

3. 提高肿瘤细胞存活率与生长率：根据经验，肿瘤细胞在体外不易培养，因此需采取特殊措施，如应用适合的底物（如鼠尾胶原）和细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等），也可考虑动物媒介培养。

（二）人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血，混合后添加2ml RPMI 1640培养基。

2. 混合均匀后，缓慢沿管壁添加至预置的4ml淋巴细胞分离液上，静置30分钟。

3. 以1500rpm旋转15分钟，提取白细胞层（第二层）至另一离心管。

4. 加入5ml RPMI 1640培养基洗涤白细胞两次。

5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，添加10μl环胞霉素和100μl的EBV液，混匀后在37℃水浴摇床中震荡40次/分钟培养3小时。

6. 以1500rpm旋转15分钟，随后将细胞转移至1ml含1mM/毫升谷氨酰胺的培养基中，加入10μl环胞霉素，轻轻混合后在37℃培养。

7. 观察细胞转化及生长状态，并决定是否进行半量换液。一般进行1-2次的半量换液，并维持环胞霉素浓度。

8. 一旦转化细胞数量显著增加并出现细胞团块，便可转入25ml细胞培养瓶中，添加1-2ml培养基，以37℃培养10-15天，每隔3-4天观察一次以决定是否换液或传代。

9. 随着细胞数量的增长，需进行冻存处理，并在冻存前进行核型分析及存档。

通过在细胞培养中应用尊龙凯时的优质技术，我们能够更有效地建立和管理细胞系及细胞株，为生物医疗研究提供坚实基础。